由于宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)試劑盒關(guān)鍵組分（校準(zhǔn)品、檢測(cè)抗體）存在固有且明顯的變異度，不同試劑盒對(duì)同一樣本的檢測(cè)結(jié)果，不僅可能在數(shù)值上出現(xiàn)較大差距，在特定 HCP（如低豐度或高風(fēng)險(xiǎn) HCP）的檢出能力上，也可能存在明顯偏差，這對(duì)生物制品 HCP 殘留的準(zhǔn)確管控構(gòu)成挑戰(zhàn)。因此，為確保檢測(cè)結(jié)果能真實(shí)反映自身產(chǎn)品的 HCP 殘留狀況，企業(yè)必須結(jié)合自身產(chǎn)品特性（如宿主細(xì)胞類型、目標(biāo)產(chǎn)物屬性）與生產(chǎn)工藝特點(diǎn)，對(duì)不同品牌、不同類型的試劑盒開展系統(tǒng)且詳細(xì)的平行比對(duì)實(shí)驗(yàn)。同時(shí)，還需進(jìn)行針對(duì)性的適用性評(píng)估，驗(yàn)證試劑盒對(duì)自身產(chǎn)品的檢測(cè)準(zhǔn)確性、特異性及穩(wěn)定性，再篩選出與自身產(chǎn)品匹配度適合的檢測(cè)方案，為生物制品的 HCP 殘留控制提供可靠技術(shù)支撐，保障產(chǎn)品質(zhì)量與用藥安全。

大腸埃希氏菌（Escherichiacoli，簡(jiǎn)稱E.coli，又稱大腸桿菌）作為模式微生物，在生命科學(xué)研究領(lǐng)域應(yīng)用較多。伴隨基因治療產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，它還成為質(zhì)粒DNA（pDNA）生產(chǎn)的主要宿主菌。質(zhì)粒樣品常規(guī)提取工藝中，常使用強(qiáng)堿性溶液進(jìn)行細(xì)胞裂解與蛋白質(zhì)變性，這種處理使其中的宿主細(xì)胞蛋白（HCPs）與傳統(tǒng)物理破碎法得到的HCPs差異明顯，進(jìn)而導(dǎo)致采用免疫學(xué)原理的檢測(cè)方法時(shí)，殘留檢測(cè)結(jié)果偏差較大。湖州申科生物的E.coli克隆菌堿裂HCP殘留檢測(cè)試劑盒，適用于大腸埃希氏菌（即大腸桿菌）克隆菌株的HCPs檢測(cè)，涵蓋DH5α、Top10、JM109等常見菌株。該試劑盒的抗體制備過程中，采用堿裂工藝制備的HCPs免疫動(dòng)物，得到專屬抗體，可用于經(jīng)堿液裂解工藝處理后的宿主細(xì)胞蛋白（HCPs）定量檢測(cè)。

湖州申科在宿主細(xì)胞蛋白（HCP）ELISA 檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域具備深厚技術(shù)積累，已成功搭建高質(zhì)量全流程自有開發(fā)平臺(tái)，覆蓋 HCP 檢測(cè)試劑盒研發(fā)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)：①抗原表征與制備：依托合規(guī)平臺(tái)的 HCP Reference/Antigen 制備能力，采用 2D 凝膠電泳等先進(jìn)技術(shù)保障抗原庫的代表性；②動(dòng)物免疫與抗體制備：憑借自有免疫動(dòng)物平臺(tái)，把控免疫原設(shè)計(jì)及動(dòng)物免疫流程，獲得高特異性、廣覆蓋度的抗體；③體系開發(fā)與驗(yàn)證：借助成熟技術(shù)經(jīng)驗(yàn)開發(fā)高靈敏度、高穩(wěn)定性檢測(cè)體系，且嚴(yán)格依照 GMP 標(biāo)準(zhǔn)完成方法學(xué)驗(yàn)證。該平臺(tái)通過全流程自主可控的技術(shù)整合，從源頭保障試劑盒性能的一致性與可靠性，降低不同批次試劑盒的檢測(cè)變異性。其研發(fā)的 HCP ELISA 試劑盒已成功為國內(nèi)外 200 余家生物醫(yī)藥企業(yè)提供服務(wù)，為單抗、疫苗等生物制品的工藝開發(fā)、質(zhì)量控制及 IND/BLA 等法規(guī)申報(bào)，提供符合監(jiān)管要求的定制化檢測(cè)解決方案。

湖州申科生物憑借自主可控的供應(yīng)鏈與經(jīng)嚴(yán)格驗(yàn)證的技術(shù)性能，確保 HCP 檢測(cè)試劑盒的長(zhǎng)期穩(wěn)定供應(yīng)及出色分析能力。一方面，公司實(shí)現(xiàn)關(guān)鍵物料自研自產(chǎn)：校準(zhǔn)品通過凍干工藝大規(guī)模生產(chǎn)，能穩(wěn)定儲(chǔ)存 10 年以上；抗體經(jīng)大動(dòng)物免疫制備，產(chǎn)量可支撐≥10,000 盒試劑盒生產(chǎn)，確保同批次抗體連續(xù)供應(yīng)超 10 年；試劑盒經(jīng)多批次驗(yàn)證，批內(nèi)與批間一致性表現(xiàn)良好。另一方面，所有產(chǎn)品均參照 ICH Q2（R2）及 ICH M10 法規(guī)要求完成驗(yàn)證：以大腸桿菌（E.coli）HCP 產(chǎn)品為例，其線性范圍（1-243 ng/mL）的 R2>0.999，各濃度點(diǎn)回收率偏差≤5%；準(zhǔn)確度處于 81.2%-111.6% 區(qū)間，中間精密度 CV 值為 5.7%-12.4%；定量限（LLOQ）低至 1.5 ng/mL，且對(duì) CHO、HEK293 等多種宿主細(xì)胞的交叉反應(yīng)均低于檢測(cè)限。同時(shí)，借助二維電泳（檢出 826 個(gè)蛋白點(diǎn)）與質(zhì)譜法（鑒定 2204 個(gè)蛋白點(diǎn)）對(duì)校準(zhǔn)品進(jìn)行雙重表征，并運(yùn)用 IMBS-2D（覆蓋率 > 70%）與 IMBS-MS（覆蓋率 84.7%）正交技術(shù)驗(yàn)證抗體覆蓋率，從源頭保障檢測(cè)結(jié)果的全面性與可靠性。

在宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)的分析方法里，ELISA法應(yīng)用較多，也是QC日常放行檢測(cè)的主要方式。該方法操作相對(duì)簡(jiǎn)便、檢測(cè)精度較好，便于設(shè)定控制范圍與制定技術(shù)規(guī)范，適用于產(chǎn)品開發(fā)及過程控制；不過，ELISA檢測(cè)依賴抗原與抗體的特異性結(jié)合，因此以生物制品中HCP為免疫原制備的抗體質(zhì)量，對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響極大。無論是市售ELISA試劑盒，還是實(shí)驗(yàn)室自制的多克隆抗體，若抗體的特異性與適用性不足，都可能導(dǎo)致HCP漏檢，進(jìn)而給生物制品質(zhì)量安全埋下隱患。另外，ELISA檢測(cè)HCP時(shí)采用多克隆抗體，無法針對(duì)性反映高風(fēng)險(xiǎn)HCP殘留蛋白的實(shí)際存在狀況。

湖州申科運(yùn)用免疫磁珠分離技術(shù)（IMBS），搭配 2D 電泳或 LC-MS 技術(shù)評(píng)估抗體覆蓋率。IMBS 的主要流程涵蓋：多克隆抗體與磁珠的偶聯(lián)反應(yīng)、磁珠未結(jié)合位點(diǎn)的封閉處理、HCP 樣本與結(jié)合抗體的磁珠共同孵育反應(yīng)。該過程中，HCP 抗體會(huì)結(jié)合可識(shí)別的 HCP，未被識(shí)別的 HCP 則通過后續(xù)洗滌步驟去除，隨后借助低 pH 等洗脫條件，收集抗體捕獲的 HCP。此方法具備 AAE（抗體親和提取，Antibody Affinity Extraction）免疫層析柱分離的全部?jī)?yōu)勢(shì)，同時(shí)免疫磁珠可在懸浮狀態(tài)下與 HCP 樣品充分混勻并結(jié)合，HCP 結(jié)合效果更優(yōu)；且依托磁珠吸附，能減少 HCP 與填料的非特異性吸附，進(jìn)一步提升實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性。